Skip to content

Livro Mães Raras

No último sábado, dia 23, aconteceu na Livraria da Vila, em São Paulo, o lançamento nacional do livro “Mães Raras: essas mulheres fortes”,  de Désirée Novaes que a partir do depoimento de sete mães –  Regina, Luana, Fátima, Linda, Rosana, Karol e Jô –  de diferentes Estados do Brasil, cada uma mãe de um filho com uma patologia rara diferente, apresenta histórias de força e amor, de medo e solidão, de crescimento pessoal e questionamentos; mas, principalmente de como se reinventaram e transformaram suas dores e dificuldades em ativismo e solidariedade a outras famílias de raros.

A autora, ela mesma paciente de uma doença rara,  é Presidente da SED Brasil e, apesar de não ter nenhum filho com doença rara, voltou seu olhar sensível e apurado para a invisibilidade dessas mães, que acumulam funções e dedicam suas vidas inteiras aos filhos com doenças raras, num trabalho lindo e inédito na literatura brasileira.

No lançamento nacional aconteceu um momento muito rico e de muita emoção: a roda de conversa com a presença de seis das mães raras que protagonizam o livro, além da autora e de Adriana Dias Higa, antropóloga da UNICAMP – uma das maiores estudiosas de doenças raras no Brasil – e que escreveu o imperdível prefácio.

Será feito o lançamento regional em todos os Estados das mães-personagens e, como tive a imensa honra de ser uma delas – onde contando um pouco da minha história, estou representando todas as mães de Distrofia Muscular de Duchenne – também haverá o lançamento em Campo Grande. Em breve divulgaremos data e local. Entretanto, para quem não quiser esperar, o livro já está à venda pelo site da Editora, a Pólen Livros.

Recomendo muito! Leiam e postem nos comentários suas impressões.

Eu e a autora, Désirée Novaes.

Momento da minha fala na roda de conversa.

Da esq. p/ dir.: Regina, Fátima, Luana, Adriana, Désirée, Linda, eu(Rosana) e Karol.

 

 

Anúncios

II Encontro Associações Representantivas de DM

Com o objetivo de empoderar e agregar informação e conhecimento às diversas organizações brasileiras que lutam pelas demandas dos pacientes com Distrofias Musculares, aconteceu nos dias 16 e 17 último, no Pullman São Paulo Guarulhos Airport, o II Encontro de Associações Representativas de Distrofia Muscular, mais uma vez organizado pela Associação Carioca de Distrofia Muscular-ACADIM.

Este ano, foram abordados temas importantes tais como, a importância do esporte para os pacientes, por Rafael Lellis Leite – capitão do time campeão “Novo Ser” de Power Soccer (Futebol em cadeira de rodas), Arthur Mohan, do movimento brasileiro dos hansenianos falou sobre o SUS e as políticas públicas em saúde, Fernanda Rangel e Angelita Rangel falaram sobre elaboração de projetos e prestação de contas – respectivamente, Maria José, da Interfarma falou sobre a delicada relação de ética entre as associações de pacientes e a industria farmacêutica.

O domingo foi reservado para a formalização e a eleição da primeira Diretoria da Aliança Distrofia Brasil-ADB, que reunirá Associações Representativas de Distrofia Muscular de todo o Brasil, entre elas a ADONE MS. Para esse importante marco contamos com a presença de Luis Cadorna, da Colômbia, Presidente da Federação Latino Americana de Distrofia Muscular, onde o Brasil se destaca ocupando a Vice-Presidência, através da Presidente da ACADIM, Clara Migowski.

 

A tecnologia CRISPR: verdades e mitos

FONTE: Fan Page no Facebook da Associação Paulista de Distrofia Muscular-APDM (a tradução não é profissional; figuras só no original, em inglês)

O que você precisa saber sobre a tecnologia CRISPR como terapia potencial para DMD:

A tecnologia CRISPR (ou edição de genoma) é uma técnica que pode mudar o DNA em locais específicos
Para Duchenne, a edição do genoma pode, em teoria, provocar o salto permanente do exon; Até agora, isso tem sido demonstrado em modelos celulares e um subconjunto de fibras musculares de camundongos mdx
A edição do genoma só terá um efeito terapêutico se um grande número de núcleos de células musculares for corrigido em pacientes – no momento em que isso não pode ser alcançado em humanos
As ferramentas para edição do genoma precisam ser entregues ao corpo com vetores virais (semelhante à terapia gênica); ainda não é possível tratar todos os músculos do corpo humano com vetores virais
Edição de genoma é uma nova técnica e mais otimização é necessária. As ferramentas atuais não são 100% específicas, arriscando assim a introdução de mutações em outros genes
A edição do genoma não é uma cura para Duchenne: o tecido muscular e a função perdida não retornarão
A edição de genoma provavelmente não estará em testes clínicos para DMD no futuro próximo!
A entrega de ferramentas de edição do genoma (terapia gênica) precisa ser otimizada (algo em que a terapia genética trabalhou durante décadas, até agora com sucesso limitado)
Os aspectos de segurança da edição do genoma precisam ser mapeados
Se você quiser ler a explicação completa de como o CRISPR funciona e quais são os desafios, por favor, continue lendo.

Por que você não deve ir junto com o hype da cura CRISPR:

Você já ouviu falar sobre CRISPR e edição de genoma e é incrível potencial e como pode ser uma cura para Duchenne em menos de 3 anos. Embora eu adoraria que isso acontecesse, não acho que essa seja uma imagem realista. E embora eu não queira diminuir suas esperanças, acredito que há algumas coisas que você precisa saber para ter mais expectativas realistas.

Como o genoma que edita o trabalho CRISPR e por que é tão sensacional?

Vamos começar com algumas informações sobre como funciona a edição do genoma e como o CRISPR entra em ação. Nossos genes consistem em DNA e contêm o código genético para proteínas. Quando há erros (mutações) nos genes, isso muitas vezes resulta na ausência de proteínas funcionais ou na produção de proteínas tóxicas, levando à doença (Figura 1). A edição do genoma visa modificar o DNA, corrigir o erro e permitir a produção de uma proteína ausente ou a redução da produção de proteína tóxica.

figura 1

Figura 1. Genes codificam proteínas. Quando os genes são mutados, isso resulta em doenças devido à falta de proteínas ou à formação de proteínas tóxicas.

Você precisa de ferramentas para modificar o DNA. A edição de genoma faz uso dos sistemas da célula que reparam o DNA quando ele está danificado. Estes sistemas são ativados quando o DNA é danificado (por exemplo, a luz UV pode gerar rupturas no DNA das células da sua pele). Quando ocorrem rupturas no DNA, os sistemas de reparo do DNA são imediatamente ativados, porque o DNA rapidamente se “desenrola” quando é quebrado e a célula não quer perder a informação genética.

Para utilizar o sistema de reparo para edição do genoma, é necessário ativar o sistema de reparo, gerando uma quebra no DNA no local da mutação. É aí que entra CRISPR – CRISPR é uma ferramenta que reconhece locais específicos no DNA e orienta uma enzima que pode cortar o DNA (Cas9) para este local. A beleza do CRISPR é que se pode projetar o componente de reconhecimento de DNA (“guia”) para reconhecer partes específicas do DNA. Embora existam algumas regras que precisam ser seguidas, é possível projetar esses componentes para segmentar especificamente a maioria das regiões do genoma. Assim, torna-se agora possível cortar ou fechar mutações.

Existem duas vias de reparo que podem ser ativadas, chamadas de junção de extremidade não homóloga (NHEJ) e recombinação homóloga (HR). O NHEJ cola as duas extremidades juntas – no entanto, como o DNA muitas vezes se desfaz um pouco antes de a quebra ser reparada, muitas vezes parte do DNA é perdido nesse processo. HR usa um modelo e troca isso pela parte que está quebrada (Figura 2). Então aqui não há perda de DNA. Com este sistema, você pode corrigir mutações: quando você introduzir uma quebra perto da mutação e fornecer um modelo com o DNA correto, este modelo será usado para reparar a quebra e a mutação será corrigida. Infelizmente, o sistema de HR é muito ineficiente e não ocorre de forma alguma em células que não se dividem, como o músculo. Portanto, para doenças musculares, somente o sistema NHEJ pode ser usado por enquanto.

Figura 2

Figura 2. CRISPR Cas9 pode cortar em uma região alvo no DNA (próximo à mutação). Isso ativará os mecanismos de reparo do DNA. A junção final não homóloga (NHEJ) ligará as duas extremidades da quebra – muitas vezes isso levará à perda de algumas das subunidades de DNA, uma vez que o DNA irá rapidamente se desfazer e quebrar devido à quebra. Quanto subunidades de DNA são perdidas será muito para cada célula-alvo, e às vezes isso levará a uma deleção da mutação. A recombinação homóloga faz uso de um modelo fornecido, contendo a informação genética correta e troca a região com a quebra (e a mutação) pelo molde (sem a mutação). Isso irá corrigir o DNA. No entanto, a recombinação homóloga é um processo muito ineficiente e parece ocorrer em células não-divisórias.

Como funciona o CRISPR para Duchenne?

Como explicado, no tecido muscular apenas o processo NHEJ está ativo. O processo NHEJ resulta em pequenas mutações no DNA reparado. Isso geralmente não é algo que é desejado. No entanto, para DMD esta perda de DNA pode ser explorada para restaurar o código genético do gene da distrofina. Como você provavelmente sabe, a DMD é causada por mutações no gene da distrofina que atrapalham o código genético. Para a maioria dos genes, incluindo a distrofina, o código genético está disperso sobre o gene nos chamados exons. A maioria dos pacientes com DMD perde um ou mais exons, fazendo com que o código genético seja interrompido (Figura 3). Quando os pacientes perdem os exons sem interromper o código genético, uma distrofina parcialmente funcional pode ser produzida. Esses pacientes têm uma doença menos grave chamada distrofia muscular de Becker.

Figura 3

Figura 3. Distrofia muscular de Duchenne é mais freqüentemente causada por deleções de um ou mais exons (exon 51 neste exemplo), resultando em uma ruptura do código genético (ilustrado pelo fato de que o exon 50 não se encaixa no exon 52). Quando o código genético é interrompido, nenhuma proteína distrofina funcional pode ser produzida, resultando na distrofia muscular de Duchenne. A distrofia muscular de Becker também é mais freqüentemente causada por deleções de um ou mais exons (exon 50 e 51 neste exemplo). No entanto, estas deleções mantêm o código genético (o exon 50 ajusta-se ao exon 53) e, portanto, uma proteína distrofina parcialmente funcional pode ser produzida.

A abordagem do salto do exon visa restaurar o código genético, excluindo um exon extra no nível de transcrição (veja http://www.exonskipping.nl/background-technology/ para uma explicação). A desvantagem deste sistema é que os transcritos são cópias genéticas temporárias com alta rotatividade e, portanto, os pacientes precisam ser tratados com o exon saltando os compostos regularmente (semanalmente nos ensaios clínicos atuais). Se fosse possível excluir um exon extra no nível do DNA, isso resultaria em um efeito permanente: todas as transcrições produzidas a partir do DNA teriam um código genético legível.

A tecnologia CRISPR foi explorada de várias maneiras para excluir um exon – os dois mais usados ​​são explicados na Figura 4. O primeiro sistema usa dois guias para direcionar uma quebra em cada lado do exon. Quando o sistema de reparos conserta essa quebra, ele às vezes une as duas extremidades externas, de modo que todo o exon é excluído. Isso restaura o código genético no nível do DNA.

Outra opção é usar apenas um guia e gerar uma única quebra perto da borda do exon. É aqui que os sinais de reconhecimento do exon estão localizados. Quando a quebra é reparada, algumas subunidades de DNA serão perdidas no processo e, conseqüentemente, os sinais de reconhecimento do exon serão perdidos. Assim, enquanto o exon ainda está presente no DNA, ele não é mais reconhecido pela maquinaria celular e não será incluído no nível do transcrito. Agora o código genético é restaurado no nível de transcrição.

figura-4

Figura 4. As duas estratégias CRISPR mais utilizadas para corrigir o código genético das mutações da distrofina. No painel superior, a exclusão é maior. Para isso, são necessárias duas guias que cortarão as duas extremidades do exon que precisam ser excluídas (neste exemplo, exon 52, porque o exon 50 e o exon 53 se encaixam). Quando os cortes duplos são reparados, às vezes as extremidades externas serão unidas e o exon será excluído. No painel inferior, o exon é irreconhecível. Quando as transcrições são geradas, cada éxon é reconhecido pelo mecanismo da célula porque contém sinais especiais de reconhecimento. Uma quebra é gerada antes do exon. Como o sistema de reparo não é perfeito, os sinais de reconhecimento serão perdidos após o reparo do intervalo. Consequentemente, o exon não será mais reconhecido e o transcrito resultante não o terá (neste exemplo, exon 52) e o código genético será restaurado. Para ambos os métodos são gerados transcritos que permitem a tradução de uma proteína distrofina tipo Becker parcialmente funcional.

Exon permanente pulando! Isso parece incrível. Então, qual é o problema?

O problema é que você precisa de ferramentas para introduzir as quebras: a enzima Cas9 que gera as quebras de DNA e o (s) guia (s) CRISPR para conduzir a enzima Cas9 ao local adequado no DNA. Não é suficiente ter essas ferramentas em um núcleo de uma fibra muscular – as ferramentas precisam ser entregues a um número significativo de núcleos nas fibras musculares de cada um dos mais de 750 músculos diferentes do corpo humano – porque quase todos eles são afetados por Duchenne. Como podemos fazer isso? Os oligonucleótidos antisense (AONs) que são utilizados para saltar o exão são pequenos e serão distribuídos por todo o corpo e absorvidos pelas fibras musculares até certo ponto. No entanto, quando você injetar a enzima Cas9, ela não será absorvida pelas fibras musculares. O truque usado atualmente é gerar um vetor viral contendo a informação genética para a enzima Cas9 e outra contendo o código genético para as guias. O vírus adeno-associado (AAV) pode ser usado para entregar esses genes ao músculo (o AAV pode infectar o músculo com eficiência razoável). Os vetores AAV foram usados ​​para fornecer Cas9 e guias para o músculo de modelos de ratos Duchenne.

De fato! Há três artigos na Science mostrando que CRISPR funciona em modelos de mouse DMD. Portanto, a prova foi fornecida e devemos começar a planejar um teste clínico!

Infelizmente, as coisas não são tão simples assim. Demonstrou-se que a terapia genética funciona em modelos de camundongos com DMD por décadas (vetores virais que fornecem um gene feito sob medida que codifica uma mini-versão da distrofina). No entanto, ainda não foi possível tratar todos os músculos de um humano com vetores virais. A terapia genética para doenças musculares enfrenta múltiplos desafios e a maioria desses desafios também é enfrentada pelo sistema CRISPR:

Temos muito músculo (~ 30-40% do nosso corpo é músculo), isto significa que muitas partículas vetoriais virais são necessárias para tratar uma boa quantidade de fibras musculares em cada um dos 750 músculos.
Os tecidos musculares não absorvem bem os vírus. É possível aumentar a captação de vírus para um braço ou uma perna usando alta pressão (perfusão hidrodinâmica do membro) – se os seres humanos responderem da mesma maneira que os cães, isso deve levar a uma boa absorção dos vírus em um braço ou perna. alguma absorção no resto do corpo
O tratamento com vetores virais trará uma resposta imune (o sistema imune não sabe que esses vírus têm boas intenções)
O vírus AAV não se integra no DNA. No músculo saudável, ficará estável por cerca de 10 anos. No entanto, no músculo distrófico, o turnover é maior. O trabalho em um modelo de cão de Duchenne mostrou que o vírus e o transgene se perdem após ~ 5 anos. Para o sistema CRISPR, isso é um problema menor do que quando o AAV é usado para fornecer um gene da mini-distrofina, porque uma vez que a mutação tenha sido corrigida, o sistema CRISPR não é mais necessário. No entanto, por outro lado, o sistema CRISPR é um sistema de duas camadas: as ferramentas Cas9 E os guias precisam ser entregues ao mesmo núcleo para funcionar. Então eles também têm que fazer o seu trabalho (o corte) e a célula terá que fazer o seu trabalho (a reparação). Esses eventos não acontecerão em todas as células de destino, mas apenas em um subconjunto.
Como todas as abordagens terapêuticas, a terapia genética depende da qualidade do músculo. A distrofina previne o dano muscular durante o exercício. Uma vez que o músculo foi perdido, ele não retornará. As abordagens terapêuticas atualmente em desenvolvimento para Duchenne visam retardar a progressão da doença, elas não trarão de volta o músculo perdido – elas não são curas. A edição do genoma não é uma exceção a isso. Quando a doença progride em pacientes com Duchenne, o tecido muscular é substituído por gordura e tecido adiposo. Os tecidos fibróticos e adiposos não produzem distrofina, portanto, a reparação do gene da distrofina nesses tecidos não terá impacto – apenas a reparação do gene da distrofina no tecido muscular.
Existem riscos envolvidos?

Tal como acontece com a maioria das terapias, existem riscos e possíveis efeitos colaterais. A edição de genoma, no entanto, tem um risco adicional, pois visa ao DNA, portanto, os efeitos são permanentes e não desaparecem quando o tratamento é interrompido. O sistema de edição do genoma não é à prova de falhas, o CRISPR é conhecido por dirigir o Cas9 também para outros locais além do alvo, levando a cortes no DNA no local errado. Existem várias maneiras em que isso pode levar a problemas, por exemplo, isso pode levar a células sendo incapazes de produzir proteínas que impedem a formação de tumores. Como dito, os efeitos no DNA são permanentes e não podem ser desfeitos. Não há botão de desfazer com a edição do genoma.

Então, o que precisa ser feito?

Eu não estou dizendo que este é o fim de toda a esperança para a edição do genoma de Duchenne. Eu estou apontando que precisamos ser cautelosos. Não devemos esperar muito dessa abordagem (não é uma cura, ela retarda a progressão da doença) e não devemos esperar coisas muito cedo. Antes que os ensaios clínicos possam ser iniciados, a entrega das ferramentas precisa ser otimizada. Isso não deve ser subestimado. O passo de um rato de 25 gramas com 16 gramas de músculo para um menino de 30 kg de Duchenne com 20 kg de músculo é enorme. Além disso, mais informações precisam ser obtidas sobre os riscos dessa tecnologia – não apenas para Duchenne, mas em geral: quão sérios são os riscos? Eles podem ser mitigados? Eles superam o risco de ter Duchenne? Isso levará tempo – algo que eu sei que os pacientes de Duchenne não têm. Contudo,

Blog on CRISPR technology
EXONSKIPPING.NL